熒光PCR凍干及蛋白質類凍干保護劑

常用的凍干保護劑種類有多輕基化合物、糖、蛋白質、聚合物、氨基酸、鹽、胺、表面活性劑等。蛋白質類凍干保護劑可分為兩種 : 一種是蛋白質藥物自身，另一種為外來蛋白質。 一些蛋白質經凍融后的活性直接和蛋白質的起始濃度有關 , 起始濃度升高有時會促進蛋白質的復性一種常用的外來蛋白質類保護劑為血清白蛋白 , 它是一個經典 、優(yōu)良的蛋白質穩(wěn)定劑 。 例如 , 冷凍時 , 1 % 牛血清白蛋白可使溶液的活性不受損失 ;人血清白蛋白則在更低濃度 ( 0 . 0 5 % 一 0. 1 % ) 時也能有效阻止蛋白質表面的吸附，對凍干過程中多數(shù)蛋白都具有保護作用。當干燥蛋白質藥物時保護劑緊密地包裹相鄰近的蛋白質分子形成一種在結構上與冰相似 的碳水化合物玻璃體,由于私度很高其擴散系數(shù)很低蛋白質分子運動能力減某一蛋白質的保護作用通常有一個好的使用濃度( 或使用量 ) , 故選擇保護劑時還要合理選擇使用量。在做溶液凍干時，溶液濃度高或低對制干燥過程中藥液表面首先品的影響。溶液濃度過高時：被干燥形成結構致密的表層。該表層孔隙細小，透氣性差，里面的水分難以穿過表層，因而沿瓶壁上升，導致制品離壁、萎縮；此外，濃度過高時，藥液在干燥過程凍干中容易結塊，所得制品外觀不均勻。濃度過低時：機械強度低，在包裝及運輸過程后制品結構比較疏松甚至變成粉末，影響制品的外觀。分享熒光PCR試劑凍干示例：(1)將熒光PCR擴增緩沖液、引物、探針、熱啟動Taq酶、UNG酶、dATP、dGTP、dCTP、dTTP、dUTP、凍干保護劑按照配方進行混合；（2）凍干保護劑，可選用：甘油、海藻糖、蔗糖、甘露醇、PEG、PVP、DTT、牛血清白蛋白、吐溫100、甲酰胺、氨基酸等。（3）將上述混合液灌裝至PCR擴增管或者八聯(lián)管中。（4）進行凍干。（5）出倉進行測試。（6）配方修正。